Pour mettre en évidence les protéines présentes

Analyse des protéines par électrophorèse

Séparation de protéines en fonction de la charge

d'après Outils pour les activités pratiques en SVT

Remplir les deux côtés de la cuve avec le tampon sans déborder.

Sortir les bandes des bacs à l'aide d'une pince, les placer entre 2 feuilles de papier filtre et les sécher à l'aide d'un mouvement rapide.

Ne jamais toucher les bandes d'acétate avec les doigts, sinon des traces apparaîtront à la coloration.

Mettre en place les feuilles d'acétate de cellulose, imbibé de solution saline conductrice, de sorte que les extrémités plongent chacune d'un côté de la cuve dans le tampon. Bien tendre les bandes. La face mate qui est absorbante doit être sur le dessus (encoche de la bande tenue dans la longueur en bas à droite). Les bandes doivent être parallèles entre elles et perpendiculaires à l'axe du portoir pour permettre une migration des protéines dans l'axe du portoir.

Déposer l'échantillon à mi-chemin du support.

Refermer la cuve.

Relier un côté de la cuve au pôle (+) et l'autre au pôle (-) du générateur.

Mettre sous tension (160V) pendant un temps déterminé ; ((45min à 1h - il faut arrêter la migration avant que les molécules n'atteignent l'extrêmité du support).

Révéler ensuite les protéines par un réactif coloré approprié, tel que le rouge Ponceau, à rincer ensuite par des bains successifs d'acide acétique 5%.

• Immerger les bandes 10 min face à traiter vers le liquide.
• Décolorer les bandes en les plongeant successivement dans deux bains d'acide acétique 5 %. Seules les traces laissées par les protéines doivent apparaître. Le fond de la bande doit redevenir blanc.

Séparation de protéines en fonction de la taille

Plonger l'échantillon dans un tube à essai supportant le chauffage avec 5mL de tampon contenant du SDS.

Chauffer le tube au bain-marie à 95°C pendant 5 min.

Mettre en place le gel d'agarose dans la cuve et repmlir la cuve avec le tampon TGS jusqu'à recouvrir le gel.

Déposer les échantillons dans les puits sans déborder et sans percer le gel.

Fermer la cuve.

Brancher la cuve au pôle (+) et au pôle (-) du générateur.

Mettre sous tension pendant un temps déterminé (il faut arrêter la migration avant que les molécules n'atteignent l'extrêmité du support)

Eteindre l'alimentation et débrancher la cuve.

Sortir le gel

Plonger le gel dans le fixateur pendant 2 min.

Plonger le gel dans le bleu de Coomassie pendant 1 min.

Plonger le gel dans la solution de décoloration pendant 1h puis dans des bains successifs d'eau distillée jusqu'à décoloration totale du support.