Pour mettre en évidence la présence d'un antigène

TEST D'IMMUNODIFFUSION OU TEST D'OUCHTERLONY

d'après Outils pour les activités pratiques en SVT

Préparation d'un gel d'Agar à couler dans une boîte de Pétri

Peser dans la coupelle 0,2g d'Agar prélevés à l'aide de la spatule.

Verser 14 mL d'eau distillée puis l'Agar dans le Bécher et dissoudre soigneusement l'Agar avec la spatule.

Chauffer le mélange en remuant à la spatule jusqu'à ce que le mélange devienne limpide et arrêter au tout début de l'ébullition.

Retirer à l'aide de la pince en bois, attendre quelques secondes que le Bécher refroidisse afin pouvoir saisir le flacon sans se brûler.

Pipeter 5 mL de gel d'Agar chaud et fluide et le verser dans une boîte de Pétri.

Egaliser le niveau et supprimer rapidement les bulles.

Laisser la boite refroidir sans mettre le couvercle.

Ne pas remuer les boîtes avant prise du gel d'Agar : environ 5 mn.

Préparation du test

Utiliser le gabarit de perçage ci-contre (ou celui qui vous est fourni) pour creuser à l'aide du tube emporte pièce les puits nécessaires dans le gel d'Agar.

Gabarit de perçage dans le gel d'Agar

Eliminer les disques de gélose avec le cure-dent si nécessaire.

Réalisation des dépôts

Marquer sur la boîte de Pétri la disposition des produits à déposer dans les puits permettant de révéler la réaction de l'anticorps étudié avec les différents antigènes proposés.

Remplir les différents puits : chaque produit devra être prélevé avec un compte goutte propre ou une micropipette à embout propre, puis être déposé dans les puits sans débordement ni bulles et sans endommager le gel d'agar.

Fermer la boite.

Observer les résultats fournis sur fond noir et en éclairage rasant.