Pour observer les pollens présents dans un niveau de tourbe

Extraction des grains de pollen

d'après Outils pour les activités pratiques en SVT

Réalisation des extraits de tourbe

Prélever un échantillon de tourbe de 2 cm³ environ,

Placer l'échantillon dans un petit bécher avec 8 cm³ de potasse à 10% et agiter,

Porter ensuite à ébullition douce pendant 8 à 10 minutes au maximum.

Préparation des culots de centrifugation

Filtrer le contenu du bécher sur tamis (125 µm) au-dessus d'un cristallisoir,

Récupérer le filtrat et le répartir dans les tubes à centrifuger,

Centrifuger 10 minutes à 2000 tours en équilibrant bien la centrifugeuse,

Vider le surnageant des tubes après centrifugation,

Laver soigneusement les culots à l'eau distillée chaude,

Centrifuger à nouveau et relaver si nécessaire jusqu'à obtention d'une suspension de pH 7 (contrôle au papier pH).

Réalisation du milieu de conservation des pollens

Verser le culot de la dernière centrifugation dans un pilulier avec un peu d'eau distillée,

Noter le niveau maximum atteint à l'aide d'un trait au marqueur indélébile,

Placer à l'étuve à 60 °C, le temps de réchauffer la solution,

Ajouter de la glycérine gélatinée de Kaiser colorée préalablement à la fuschine basique et liquéfiée à l'étuve jusqu'à atteindre une hauteur de niveau double du trait de marqueur,

Laisser évaporer l'eau des piluliers ouverts à l'étuve jusqu'à redescendre au trait marqué initialement (parfois 12h sous surveillance attentive),

Sortir alors les piluliers,

Laisser refroidir et coller une étiquette avec les informations adéquates.

Réalisation des préparations microscopiques

Le pilulier est préalablement passé à l'étuve à 60° pour liquéfier le milieu de conservation des pollens.

Prélever un peu de culot gélatiné au compte-gouttes dans le pilulier,

Déposer une goutte de ce milieu gélatiné sur une lame,

Bien étaler et recouvrir d'une lamelle (appuyer sur la lamelle si nécessaire),

Nettoyer la préparation à l'alcool si nécessaire

NB : Les lames se conservent longtemps, posées à plat et lutées avec un vernis à ongles transparent et ne jaunissant pas.