Pour mettre en évidence les acides aminés présents

Séparation d'acides aminés par chromatographie

La cuve à chromatographie est préparée 24 h à l'avance avec 1cm de solvant au fond. Elle est fermée hermétiquement avec le film plastique

1- Préparer la feuille à chromatographie :

• découper un rectangle de 16 x 14 cm,
• tracer un léger trait de crayon à 1,5 cm du bord inférieur du rectangle: sur ce trait seront déposées les microgouttes. Un espace d'au moins 2,5 cm doit être respecté entre les gouttes. La première et la dernière doivent être déposées au moins à 2 cm du bord vertical.

2 - Déposer les microgouttes :

• déposer une microgoutte un peu au dessus du trait; sécher au sèche-cheveux puis en déposer une autre par dessus, sécher,... On peut aller jusqu'à 4 ou 5 gouttes superposées.
• procéder ainsi pour chaque solution : le mélange à séparer plus des solutions témoins avec des acides aminés connus.

3 - Faire un cylindre avec la feuille à chromatographie. Mettre une agrafe à la partie supérieure (ou un trombone); lorsque les 2 bords du rectangle sont proches (éviter un trop grand chevauchement)...une deuxième agrafe au bord inférieur n'est pas nécessaire: on a alors un cône.

4 - Placer ensuite le cylindre (le cône) dans la cuve en l'appuyant contre un bord.

En aucun cas, le solvant ne doit atteindre les microgouttes séchées; il doit le faire par capillarité.

Refermer immédiatement la cuve.

5 - Au bout d'une heure, sortir le cylindre. Découper le papier autour de l'agrafe pour le dérouler. Sécher complètement à l'aide du séchoir à cheveux le chromatogramme en évitant de le déchirer. Le fixer sur un support en bois avec les punaises.

6 - Révéler (A faire par le professeur, sous la hotte !): vaporiser sous la hotte la solution de ninhydrine sur le(s) chromatogramme(s).

7 - Sécher à l'air sous la hotte, puis attendre une demi-heure avant d'interpréter le chromatogramme.

Des tâches rouge violacée indiquent la position des acides aminés; la proline se colore en jaune.

d'après un article de l'académie de Lyon