Faire un comptage sur lame de numération :

Les lames de numération sont des lames quadrillées. Chaque case correspond à un certain volume.

On compte le nombre de cellules par case. Le volume étant connu, on peut calculer la concentration. Pour un résultat plus sûr, on comptera le nombre de cellules dans plusieurs cases afin de calculer une moyenne.

Les cellules qui se trouvent à cheval sur deux cases sont comptées dans une case quand elles se trouvent sur le côté inférieur ou le côté droit de cette case..

En cas de comptage trop difficile, il pourra être nécessaire de faire une dilution.

Comptage sur lame de Kova

Après agitation, mettre avec une pipette pasteur une goutte de suspension de cellules dans l'une des cupules de la lame de Kova.

Sur la cupule se trouvent 9 grilles de 0,1 µL de volume, divisées  chacune en 9 carrés (0,011 µL)

Au microscope, compter les cellules présentes dans plusieurs cases.

Calculer le nombre moyen de cellules par case.

Ramener ce résultat au nombre de levures par µL ou mL en tenant compte du volume d'une case de la cellule utilisée.

Comptage sur cellule de Mallassez

Après agitation, mettre une goutte de suspension de cellules sur la lame de Mallassez et recouvrir d'une lamelle.

Sur la lame se trouvent 20 carrés de 0,5.10^-3 µL de volume, formant des rectangles au croisement des quadrillages

Au microscope, compter les cellules présentes dans plusieurs cases.

Calculer le nombre moyen de cellules par case.

Ramener ce résultat au nombre de levures par µL ou mL en tenant compte du volume d'une case de la cellule utilisée.

d'après http://www.ac-creteil.fr/svt/Scexp/complev.htm

Pour effectuer ces comptages, il pourra être plus simple de prendre une photographie et d'utiliser Mesurim pour compter les cellules.

Determiner la concentration de cellules avec le turbidimètre ExAO

Le turbidimètre mesure la proportion de lumière absorbée par la solution. Plus il y a de cellules, plus il y aura de lumière absorbée par elles donc moins il y aura de lumière qui traverse la solution. Il faudra d'abord construire une courbe étalon pour établir une relation entre cette absorbance et la concentration de cellules, puis il suffira de reporter la valeur mesurée dans la suspension inconnue pour déterminer sa concentration.

Construction de la courbe étalon

Préparer une gamme de suspensions de cellules de concentration connue.

Mesurer l'absorbance de chacune d'elle avec le turbidimètre, à l'obscurité (par exemple dans le bioréacteur)

Construire le graphique donnant l'absorbance en fonction de la concentration de cellules : c'est la courbe étalon.

Détermination de la concentration en cellules :

Mesurer l'absorbance de la suspension inconnue avec le turbidimètre.

Reporter cette valeur en ordonnées sur la courbe étalon. La valeur correspondante en abscisses est la concentration de la suspension.