Principe de la technique SKY
La technique SKY, basée sur les techniques d'hybridation, nécessite la préparation d'une grande collection de séquences courtes d'ADN simple brin appelées sondes. Chacune des sondes individuelles dans cette bibliothèque d'ADN est complémentaires d'une unique région d'un chromosome, l'ensemble des sondes étant complémentaire de tous les chromosomes du génome humain. Après hybridation, chaque chromosome sera apparié avec un grand nombre de sondes.
Chaque sonde est étiquetée avec une molécule fluorescente. Ainsi chaque chromosome sera hybridé avec un jeu de sondes qui lui donneront une couleur (fluorescence) particulière identifiée par analyse spectrale. Par exemple, les sondes qui sont complémentaires du chromosome 1 sont étiquetées avec des molécules jaunes, tandis que celles qui sont complémentaires du chromosome 2 sont étiquetées avec des molécules rouges, alors que d'autres seront hybridées avec des sondes portant des molécules fluorescentes différentes. A chaque chromosome correspondra un jeu de fluochromes. Les scientifiques effectuent alors une analyse spectrale des chromosomes peints à l'aide d'ordinateurs et peuvent ainsi déterminer si l'un d'entre eux présente des translocations ou d'autres anomalies structurales. Plus les sondes sont de petite taille plus la précision de l'analyse sera grande.
D'après NIH, Glossary, http:///www.nih......
Les utilisations
Un grand nombre de maladies sont associées à des anomalies chromosomiques particulières. Par exemple, les chromosomes dans les cellules cancéreuses (tumeurs solides) présentent fréquemment des aberrations chromosomiques de type translocation.
A l'heure actuelle beaucoup de troubles d'origine génétique ne sont pas aisément identifiables avec les autres techniques. En effet, le caryotypage traditionnel permet aux scientifiques d'analyser le jeu complet de chromosomes humain en fonction de l'alternance des bandes sombres et claires (G-banding) et d'identifier les anomalies mettant en jeu de grandes portions de l'ADN. Il n'est cependant pas possible d'identifier des anomalies plus fines en utilisant seulement ce type de caryotypage.
En utilisant la technique SKY, ils peuvent voir facilement les translocations fines, ce qui se traduit par un chromosome, peint dans une couleur, auquel est attaché un petit morceau d'un chromosome différent, peint dans une autre couleur.