Aide
à la recherche
Sites
et ressources locales
Activité
pédagogiques
Banques
de données
|
Etude
de la paroi pecto-cellulosique végétale par "ablation"
moléculaire
Niveau : Première S
Partie du programme: "Des phénotypes à différents
niveaux d'organisation du vivant" "Génotype, phénotype
et morphogenèse de la plante"
Problématique: après avoir vu que la croissance
d'un végétal se faisait par division cellulaire et élongation,
on peut se demander quels sont les constituants de la plante qui lui confèrent
la double propriété de cohésion cellulaire et de
cadre cellulaire.
L'utilisation d'enzymes spécifiques des différents constituants
pariétaux va permettre non seulement de réinvestir les acquis
sur le mode d'action des enzymes (plus particulièrement la spécificité
de substrat) mais aussi de mettre en évidence la fonction de ces
différents constituants.
En effet, la pectinase par son action hydrolytique sur le constitutant
majoritaire de la lamelle moyenne va mettre en évidence le rôle
cohésif de cette structure. Les cellules gardant leur cadre rigide
cellulosique
D'autre part, l'action de la cellulase (plus difficile à mettre
en évidence ) ne permet pas de séparer le cellules (la lamelle
moyenne restant présente).
Enfin, l'action conjuguée des deux enzyme permet d'obtenir des
cellules végétales isolées et sphériques :
les Protoplastes.
Protocole expérimental.
Solution 1
- Pour 100 ml de tampon phosphate 10 mM à pH 5,8
- 0,2 g de macérozyme Onozuka
- 10 g de mannitol (0,6 M)
|
Préparation du tampon phosphate :
- réaliser une solution de NaH2PO4 à 0,2 M (solution A) et une
solution de Na2HPO4 à 0,2 M (solution B);
- mélanger : 4,6 ml de solution A, 0,4 ml de solution B, 95 ml
d'eau
|
Solution 2
- Pour 100 ml de tampon phosphate 10 mM à pH 5,8
- 0,2 g de cellulase Onozuka
- 10 g de mannitol (0,6 M)
|
Solution 3
- Pour 100 ml de tampon phosphate 10 mM à pH 5,8
- 0,2 g de macérozyme Onozuka
- 0,2 g de cellulase Onozuka
- 10 g de mannitol (0,6 M)
|
PS: les enzymes sont chers mais l'on peut conserver les solutions au
congélateur.
Préparation du matériel biologique
- Faire des lamelles tangentielles fines dans une feuille de poireau
et plonger les lamelles immédiatement dans les différentes
solutions en prenant soin de placer la face sectionnée vers la
solution.
Incubation
Les boites de pétri sont placées à 30°C pendant
une heure.
Observation
On peut prélever les lamelles incubées avec une pince fine
et les tapoter sur la lame. On peut alors observer dans une goutte de
la solution d'incubation.
|
|
|
Cellules dans solution 1
La présence de pectinase a permis la digestion
de la lamelle moyenne et donc la séparation des cellules
mais la présence de la partie cellulosique de la paroi
maintient un certain cadre à la cellule.
|
Cellules dans solution 2
La présence de cellulase dans la solution
a permis la digestion de la partie cellulosique de la paroi mais
la lamelle moyenne, encore présente, cimente les cellules
végétales.
|
Cellules dans solution 3
La présence dans la solution de cellulase
et de pectinase (macerozyme) permet une digestion totale de la
paroi et le formation de protoplastes
|
Où trouver les produits?
cellulase Onozuka R10 ref : 16419.02
macérozyme Onozuka R10 ref : 28302.02
SERVA, distribué par COGER, 79 rue des Morillons 75015 Paris Tel : 01
45 33 67 17
Informations complémentaires
Sur
le site Vie
Sur le site BIOTIC.(très bientôt)
Auteur : alain Pothet
|