Comment mesurer une densité optique sur une image ?

On pourra utiliser le logiciel MESURIM.

Principe de mesure de l’absorbance :

Le principe général de la méthode repose sur le fait qu’une suspension de cellules n’est pas parfaitement transparente : elle absorbe d’autant plus la lumière, que la concentration cellulaire y est importante (proportionnalité). La quantité de lumière absorbée

(= absorbance ou densité optique) peut être mesurée, selon le principe suivant :

 

*monochromatique = lumière d’une seule couleur (bleue ou rouge ou verte, …)

Pour faire la mesure avec Mesurim, à partir d'images, par exemple photographies de solutions de cellules

Charger une image (fichier, ouvrir + nom de fichier) correspondant à une concentration nulle ou que l'on considérera comme nulle.

Sélectionner l’outil de mesure puis la nature de la mesure : ici lumière sur un rectangle.

Dans la fenêtre affichée :

Charger ensuite l'image sur laquelle doit se faire la mesure et avec la souris tracer un rectangle. Faire de même pour les autres photos en prenant des rectangles de même taille et aux mêmes endroits.

Pour revenir à une concentration , il faut construire la courbe étalon donnant la concentration en fonction de la densité optique. Pour cela :

Préparer une série de solutions de concentration connue.

Mesurer pour chacune la densité optique et relever les valeurs.

Tracer le graphique concentration en fonction de la densité optique.

Une fois que l'on possède la courbe étalon, il suffit d'y reporter en abscisses la DO d'une solution de concentration inconnue pour lire cette concentration en ordonnées.